Dankon pro vizito de Nature.com. La retumila versio, kiun vi uzas, havas limigitan CSS-subtenon. Por plej bonaj rezultoj, ni rekomendas uzi pli novan retumilon (aŭ malŝalti kongruecreĝimon en Internet Explorer). Intertempe, por certigi daŭran subtenon, ni montros la retejon sen stiloj kaj JavaScript.
La nigra soldatmuŝo ( Hermetia illucens , L. 1758) estas ĉiovora detrivora insekto kun alta potencialo por utiligado de karbonhidrat-riĉaj organikaj kromproduktoj. Inter karbonhidratoj, nigraj soldatmuŝoj dependas de solveblaj sukeroj por kresko kaj lipida sintezo. La celo de ĉi tiu studo estis taksi la efikojn de oftaj solveblaj sukeroj sur la evoluo, supervivo, kaj grasacida profilo de nigraj soldatmuŝoj. Suplementu kokan nutradon per monosakaridoj kaj disakaridoj aparte. Celulozo estis uzata kiel kontrolo. Larvoj manĝigitaj glukozo, fruktozo, sakarozo kaj maltozo kreskis pli rapide ol kontrollarvoj. Kontraste, laktozo havis kontraŭnutran efikon al larvoj, bremsante kreskon kaj reduktante finan individuan korpan pezon. Tamen, ĉiuj solveblaj sukeroj igis larvojn pli grasaj ol tiuj nutritaj la kontroldieton. Precipe, la testitaj sukeroj formis la grasacidan profilon. Maltozo kaj sakarozo pliigis la saturitan grasacidan enhavon kompare kun celulozo. Kontraste, laktozo pliigis la bioakumuladon de dietaj nesaturitaj grasacidoj. Ĉi tiu studo estas la unua, kiu pruvas la efikon de solvebla sukero sur la grasacida konsisto de nigraj soldatmuŝolarvoj. Niaj rezultoj indikas, ke la testitaj karbonhidratoj havas signifan efikon al la grasacida konsisto de nigraj soldatmuŝolarvoj kaj tial povas determini ilian finan aplikon.
La tutmonda postulo je energio kaj besta proteino daŭre pliiĝas1. En la kunteksto de mondvarmiĝo, estas necese trovi pli verdajn alternativojn al fosilia energio kaj tradiciaj manĝaĵproduktadmetodoj dum pliigo de produktado. Insektoj estas promesplenaj kandidatoj trakti ĉi tiujn problemojn pro sia pli malalta kemia konsisto kaj media efiko kompare kun tradicia brutobredado2. Inter insektoj, bonega kandidato por trakti ĉi tiujn aferojn estas la nigra soldatmuŝo (BSF), Hermetia illucens (L. 1758), detrivora specio kapabla nutri sin per diversaj organikaj substratoj3. Tial, valorigi ĉi tiujn substratojn per BSF-bredado povus krei novan fonton de krudaĵoj por renkonti la bezonojn de diversaj industrioj.
BSF-larvoj (BSFL) povas nutriĝi je agrikulturaj kaj agroindustriaj kromproduktoj kiel ekzemple bierfaristoj greno, vegetaĵaj restaĵoj, fruktopulpo kaj malfreŝa pano, kiuj estas precipe taŭgaj por BSFL-kresko pro sia alta karbonhidrato (CH)4,5, 6 enhavo. Grandskala produktado de BSFL rezultigas la formadon de du produktoj: feko, miksaĵo de substratrestaĵoj kaj feko kiu povas esti uzata kiel sterko por plantkultivado7, kaj larvoj, kiuj estas ĉefe kunmetitaj de proteinoj, lipidoj kaj kitino. Proteinoj kaj lipidoj estas ĉefe uzataj en brutobredado, biokarburaĵo kaj kosmetikaĵoj8,9. Koncerne la kitinon, ĉi tiu biopolimero trovas aplikojn en la agronutraĵa sektoro, bioteknologio kaj sanservo10.
BSF estas aŭtogena holometabola insekto, kio signifas, ke ĝia metamorfozo kaj reproduktado, precipe la energikonsumantaj stadioj de la vivociklo de la insekto, povas esti tute subtenataj de nutraj rezervoj generitaj dum larva kresko11. Pli specife, sintezo de proteino kaj lipido kondukas al la disvolviĝo de la grasa korpo, grava stoka organo kiu liberigas energion dum la nemanĝaj fazoj de BSF: prepupa (t.e., la fina larva stadio dum kiu BSF-larvoj nigriĝas dum manĝado kaj serĉado). por medio taŭga por metamorfozo), pupoj (t.e., la senmova stadio dum kiu la insekto spertas metamorfozon), kaj plenkreskuloj12,13. CH estas la ĉefa energifonto en la dieto de BSF14. Inter ĉi tiuj nutraĵoj, fibreca CH kiel hemicelulozo, celulozo kaj lignino, male al disakaridoj kaj polisakaridoj (kiel ekzemple amelo), ne povas esti digestita de BSFL15,16. Digestado de CH estas grava antaŭpaŝo por la sorbado de karbonhidratoj, kiuj estas finfine hidroligitaj al simplaj sukeroj en la intesto16. La simplaj sukeroj tiam povas esti sorbitaj (t.e., tra la intesta peritrofa membrano) kaj metaboligitaj por produkti energion17. Kiel menciite supre, larvoj stokas troan energion kiel lipidoj en la grasa korpo12,18. La stokaj lipidoj konsistas el trigliceridoj (neŭtralaj lipidoj formitaj el unu glicerina molekulo kaj tri grasacidoj) sintezitaj de la larvoj el manĝaj simplaj sukeroj. Ĉi tiuj CH disponigas la acetil-CoA-substratojn necesajn por grasacidaj (FA) biosintezo per la grasacida sintazo kaj tioesterazaj vojoj19. La grasacida profilo de H. illucens-lipidoj estas nature regata de saturitaj grasacidoj (SFA) kun alta proporcio de laŭra acido (C12:0)19,20. Tial, la alta lipidenhavo kaj grasacida konsisto rapide fariĝas limigaj faktoroj por la uzo de tutaj larvoj en bestnutrado, precipe en akvokulturo kie polinesaturitaj grasacidoj (PUFA) estas necesaj21.
Ekde la malkovro de la potencialo de BSFL redukti organikan rubon, studoj pri la valoro de diversaj kromproduktoj montris, ke la konsisto de BSFL estas parte reguligita de sia dieto. Nuntempe, la reguligo de la FA-profilo de H. illucens daŭre pliboniĝas. La kapablo de BSFL bioakumuli PUFA estis pruvita sur PUFA-riĉaj substratoj kiel ekzemple algoj, fiŝorubo, aŭ manĝoj kiel ekzemple lino, kiu disponigas pli altkvalitan FA-profilon por besta nutrado19,22,23. Kontraste, por kromproduktoj, kiuj ne estas riĉigitaj en PUFA, ne ĉiam estas korelacio inter la dietaj FA-profiloj kaj la larva FA, indikante la influon de aliaj nutraĵoj24,25. Fakte, la efiko de digestebla CH sur FA-profiloj restas malbone komprenita kaj subesplorita24,25,26,27.
Laŭ nia scio, kvankam totalaj monosakaridoj kaj disakaridoj abundas en la dieto de H. illucens, ilia nutra rolo restas nebone komprenita en la nutrado de H. illucens. La celo de ĉi tiu studo estis klarigi iliajn efikojn al BSFL-nutrado kaj lipidkonsisto. Ni taksos la kreskon, supervivon kaj produktivecon de larvoj sub malsamaj nutraj kondiĉoj. Poste, ni priskribos la lipidan enhavon kaj grasacidan profilon de ĉiu dieto por reliefigi la efikojn de CH sur BSFL-nutra kvalito.
Ni hipotezis, ke la naturo de la provita CH influus (1) larvan kreskon, (2) totalajn lipidnivelojn kaj (3) modulus la FA-profilon. Monosakaridoj povas esti absorbitaj rekte, dum disakaridoj devas esti hidroligitaj. Monosakaridoj estas tiel pli haveblaj kiel rektaj energifontoj aŭ antaŭuloj por lipogenezo per la FA-sintezazo kaj tioesterazo-padoj, tiel plibonigante H. illucens larvokreskon kaj antaŭenigante la amasiĝon de rezervaj lipidoj (aparte laŭra acido).
La provita CH influis la averaĝan korpan pezon de larvoj dum kresko (Fig. 1). FRU, GLU, SUC kaj MAL pliigis larvan korpan pezon simile al la kontroldieto (CEL). En kontrasto, LAC kaj GAL ŝajnis prokrasti larvan evoluon. Notinde, LAC havis signifan negativan efikon sur larva kresko kompare kun SUC dum la kreska periodo: 9.16 ± 1.10 mg kontraŭ 15.00 ± 1.01 mg en la tago 3 (F6,21 = 12.77, p <0.001; Fig. 1), 125.11 ± 4. mg kaj 211,79 ± 14,93 mg, respektive, en la tago 17 (F6,21 = 38.57, p <0.001; Fig. 1).
Uzante malsamajn monosakaridojn (fruktozo (FRU), galaktozo (GAL), glukozo (GLU)), disakaridoj (laktozo (LAC), maltozo (MAL), sakarozo (SUC)) kaj celulozo (CEL) kiel kontroloj. Kresko de larvoj manĝitaj per nigraj soldatmuŝolarvoj. Ĉiu punkto sur la kurbo reprezentas la averaĝan individuan pezon (mg) kalkulitan pesante 20 hazarde elektitajn larvojn el populacio de 100 larvoj (n = 4). Eraraj stangoj reprezentas SD.
La CEL-dieto disponigis bonegan larvan supervivon de 95.5 ± 3.8%. Plie, la postvivado de H. illucens nutritaj dietoj enhavantaj solveblan CH estis reduktita (GLM: χ = 107.13, df = 21, p < 0.001), kio estis kaŭzita de MAL kaj SUC (disakaridoj) en la studita CH. La morteco estis pli malalta ol tiu de GLU, FRU, GAL (monosakarido) kaj LAC (EMM: p <0.001, Figuro 2).
Kestintrigo de supervivo de nigraj soldatmuŝolarvoj traktitaj kun diversaj monosakaridoj (fruktozo, galaktozo, glukozo), disakaridoj (laktozo, maltozo, sakarozo) kaj celulozo kiel kontroloj. Traktado kun la sama litero ne estas signife malsamaj unu de la alia (EMM, p > 0.05).
Ĉiuj dietoj testitaj permesis al larvoj atingi la prepupan stadion. Tamen, la CH-oj testitaj emis plilongigi larvan disvolviĝon (F6,21=9.60, p<0.001; Tablo 1). Aparte, larvoj nutritaj GAL kaj LAC daŭris pli longe por atingi la antaŭpupa stadio kompare kun larvoj breditaj sur CEL (CEL-GAL: p<0.001; CEL-LAC: p<0.001; Tabelo 1).
La provita CH ankaŭ havis malsamajn efikojn sur la larva korpa pezo, kun la korpa pezo de larvoj nutritaj la CEL-dieto atingante 180.19 ± 11.35 mg (F6,21 = 16.86, p <0.001; Fig. 3). FRU, GLU, MAL kaj SUC rezultigis mezan finan larvan korpan pezon de pli ol 200 mg, kiu estis signife pli alta ol tiu de CEL (p < 0.05). En kontrasto, larvoj manĝitaj GAL kaj LAC havis pli malaltajn korpopezojn, averaĝe 177.64 ± 4.23 mg kaj 156.30 ± 2.59 mg, respektive (p < 0.05). Ĉi tiu efiko estis pli prononcita kun LAC, kie fina korpa pezo estis pli malalta ol kun la kontrola dieto (CEL-LAC: diferenco = 23.89 mg; p = 0.03; Figuro 3).
Meza fina pezo de individuaj larvoj esprimitaj kiel larvaj makuloj (mg) kaj nigraj soldatmuŝoj esprimitaj kiel histogramo (g) manĝis malsamajn monosakaridojn (fruktozo, galaktozo, glukozo), disakaridojn (laktozo, maltozo, sakarozo) kaj celulozon (kiel kontrolo). Kolumnaj literoj reprezentas grupojn signife malsamajn en totala larva pezo (p < 0.001). Literoj asociitaj kun larvaj makuloj reprezentas grupojn kun signife malsamaj individuaj larvaj pezoj (p < 0.001). Eraraj stangoj reprezentas SD.
Maksimuma individua pezo estis sendependa de la maksimuma fina totala larva koloniopezo. Fakte, dietoj enhavantaj FRU, GLU, MAL kaj SUC ne pliigis la totalan larvan pezon produktitan en la tanko kompare kun CEL (Figuro 3). Tamen, LAC signife malpliigis la totalan pezon (CEL-LAC: diferenco = 9.14 g; p <0.001; Figuro 3).
Tablo 1 montras la rendimenton (larvoj/tago). Interese, la optimumaj rendimentoj de CEL, MAL kaj SUC estis similaj (Tablo 1). Kontraste, FRU, GAL, GLU kaj LAC reduktis la rendimenton kompare kun CEL (Tablo 1). GAL kaj LAC faris la plej malbonan: la rendimento estis duonigita al nur 0.51 ± 0.09 g larvoj/tage kaj 0.48 ± 0.06 g larvoj/tage, respektive (Tabelo 1).
Monosakaridoj kaj disakaridoj pliigis la lipidan enhavon de la CF-larvoj (Tablo 1). En la CLE-dieto, larvoj kun lipida enhavo de 23,19 ± 0,70% de la DM-enhavo estis akiritaj. Por komparo, la averaĝa lipidenhavo en larvoj manĝitaj kun solvebla sukero estis pli ol 30% (Tabelo 1). Tamen, la testitaj CHoj pliigis sian grasenhavon en la sama mezuro.
Kiel atendite, la CG-subjektoj influis la FA-profilon de la larvoj en diversaj gradoj (Fig. 4). La enhavo de SFA estis alta en ĉiuj dietoj kaj atingis pli ol 60%. MAL kaj SUC malekvilibrigis la FA-profilon, kio kaŭzis pliiĝon en la SFA-enhavo. En la kazo de MAL, unuflanke, ĉi tiu malekvilibro kaŭzis ĉefe malpliigon de la enhavo de mononesaturitaj grasaj acidoj (MUFA) (F6,21 = 7.47; p <0.001; Fig. 4). Aliflanke, por SUC, la malkresko estis pli unuforma inter MUFA kaj PUFA. LAC kaj MAL havis kontraŭajn efikojn sur la FA-spektro (SFA: F6,21 = 8.74; p < 0.001; MUFA: F6,21 = 7.47; p < 0.001; PUFA: χ2 = 19.60; Df = 6; p < 0.001; Figuro; 4). La pli malalta proporcio de SFA en LAC-manĝitaj larvoj ŝajnas pliigi la MUFA-enhavon. Aparte, MUFA-niveloj estis pli altaj en larvoj nutritaj de LAC kompare kun aliaj solveblaj sukeroj krom GAL (F6,21 = 7.47; p <0.001; Figuro 4).
Uzante malsamajn monosakaridojn (fruktozo (FRU), galaktozo (GAL), glukozo (GLU)), disakaridoj (laktozo (LAC), maltozo (MAL), sakarozo (SUC)) kaj celulozo (CEL) kiel kontroloj, kestploto de grasacido komponaĵo nutrita al nigraj soldatmuŝolarvoj. Rezultoj estas esprimitaj kiel procento de totala FAME. Traktadoj markitaj per malsamaj literoj estas signife malsamaj (p < 0.001). (a) Proporcio de saturitaj grasacidoj; (b) mononesaturitaj grasacidoj; (c) Polinesaturitaj grasacidoj.
Inter la identigitaj grasacidoj, laŭra acido (C12:0) estis domina en ĉiuj observitaj spektroj (pli ol 40%). Aliaj nunaj SFAoj estis palmita acido (C16:0) (malpli ol 10%), stearata acido (C18:0) (malpli ol 2.5%) kaj kaprica acido (C10:0) (malpli ol 1.5%). MUFAoj estis plejparte reprezentitaj de oleika acido (C18: 1n9) (malpli ol 9.5%), dum PUFAoj estis ĉefe kunmetitaj de linoleika acido (C18: 2n6) (malpli ol 13.0%) (vidu Suplementan Tabelon S1). Krome, malgranda proporcio de kunmetaĵoj ne povus esti identigita, precipe en la spektroj de CEL-larvoj, kie neidentigita kunmetaĵo numero 9 (UND9) konsistigis mezumon de 2.46 ± 0.52% (vidu Suplementan Tabelon S1). GC×GC-FID-analizo sugestis, ke ĝi povus esti 20-karbona grasa acido kun kvin aŭ ses duoblaj ligoj (vidu Suplementan Figuro S5).
La analizo de PERMANOVA malkaŝis tri apartajn grupojn bazitajn sur la profiloj de grasacido (F6,21 = 7.79, p <0.001; Figuro 5). Ĉefkomponenta analizo (PCA) de la TBC-spektro ilustras tion kaj estas klarigita per du komponentoj (Figuro 5). La ĉefkomponentoj klarigis 57.9% de la varianco kaj inkludis, en ordo de graveco, laŭra acido (C12:0), oleika acido (C18:1n9), palmita acido (C16:0), stearacido (C18:0), kaj linolena acido (C18:3n3) (vidu Figuro S4). La dua komponanto klarigis 26.3% de la varianco kaj inkludis, en ordo de graveco, dekanoika acido (C10: 0) kaj linoleika acido (C18: 2n6 cis) (vidu Suplementan Figuro S4). La profiloj de dietoj enhavantaj simplajn sukerojn (FRU, GAL kaj GLU) montris similajn trajtojn. En kontrasto, disakaridoj donis malsamajn profilojn: MAL kaj SUC unuflanke kaj LAC aliflanke. Aparte, MAL estis la nura sukero, kiu ŝanĝis la FA-profilon kompare kun CEL. Krome, la MAL-profilo estis signife diferenca de la FRU kaj GLU-profiloj. Aparte, la MAL-profilo montris la plej altan proporcion de C12: 0 (54.59 ± 2.17%), igante ĝin komparebla al la CEL (43.10 ± 5.01%), LAC (43.35 ± 1.31%), FRU (48.90 ± 1.97%) kaj GLU (48.38 ± 2.17%) profiloj (vidu Suplementan Tabelon S1). La MAL-spektro ankaŭ montris la plej malsupran C18:1n9 enhavon (9.52 ± 0.50%), kiu plue diferencigis ĝin de la LAC (12.86 ± 0.52%) kaj CEL (12.40 ± 1.31%) spektroj. Simila tendenco estis observita por C16:0. En la dua komponento, la LAC-spektro montris la plej altan C18:2n6 enhavon (17.22 ± 0.46%), dum MAL montris la plej malaltan (12.58 ± 0.67%). C18: 2n6 ankaŭ diferencis LAC de la kontrolo (CEL), kiu montris pli malaltajn nivelojn (13.41 ± 2.48%) (vidu Suplementan Tabelon S1).
PCA-intrigo de grasacida profilo de nigraj soldatmuŝolarvoj kun malsamaj monosakaridoj (fruktozo, galaktozo, glukozo), disakaridoj (laktozo, maltozo, sakarozo) kaj celulozo kiel kontrolo.
Por studi la nutrajn efikojn de solveblaj sukeroj sur larvoj de H. illucens, celulozo (CEL) en kokida nutraĵo estis anstataŭigita per glukozo (GLU), fruktozo (FRU), galaktozo (GAL), maltozo (MAL), sakarozo (SUC), kaj laktozo (LAC). Tamen, monosakaridoj kaj disakaridoj havis malsamajn efikojn al la evoluo, supervivo, kaj kunmetaĵo de HF-larvoj. Ekzemple, GLU, FRU, kaj iliaj disakaridformoj (MAL kaj SUC) penis pozitivajn subtenajn efikojn al larvokresko, permesante al ili atingi pli altajn finajn korpopezojn ol CEL. Male al nedigesteblaj CEL, GLU, FRU kaj SUC povas preteriri la intestan baron kaj servi kiel gravaj nutraj fontoj en formulitaj dietoj16,28. Al MAL mankas specifaj bestaj transportiloj kaj supozeble estas hidroligita al du glukozomolekuloj antaŭ asimilado15. Tiuj molekuloj estas stokitaj en la insekta korpo kiel rekta energifonto aŭ kiel lipidoj18. Unue, koncerne ĉi-lastan, kelkaj el la observitaj intramodaj diferencoj povas ŝuldiĝi al malgrandaj diferencoj en seksproporcioj. Efektive, ĉe H. illucens, reproduktado povas esti tute spontanea: plenkreskaj inoj nature havas sufiĉajn ovodemetatajn rezervojn kaj estas pli pezaj ol maskloj29. Tamen, lipida amasiĝo en BSFL korelacias kun dieta solvebla CH2-konsumado, kiel antaŭe observite por GLU kaj xylose26,30. Ekzemple, Li et al.30 observis, ke kiam 8% GLU estis aldonita al la larva dieto, la lipidenhavo de BSF-larvoj pliiĝis je 7.78% kompare kun kontroloj. Niaj rezultoj estas kongruaj kun ĉi tiuj observoj, montrante, ke grasenhavo en larvoj nutritaj la solvebla sukero estis pli alta ol tiu de larvoj nutritaj la CEL-dieto, kompare kun 8.57% pliiĝo kun GLU-suplemento. Surprize, similaj rezultoj estis observitaj en larvoj manĝitaj GAL kaj LAC, malgraŭ la malutilaj efikoj al larvokresko, fina korpopezo, kaj supervivo. Larvoj manĝigitaj LAC estis signife pli malgrandaj ol tiuj manĝitaj la CEL-dieto, sed ilia grasenhavo estis komparebla al larvoj manĝigitaj la aliaj solveblaj sukeroj. Ĉi tiuj rezultoj elstarigas la kontraŭnutrajn efikojn de laktozo sur BSFL. Unue, la dieto enhavas grandan kvanton da CH. La sorbado kaj hidrolizaj sistemoj de monosakaridoj kaj disakaridoj, respektive, povas atingi saturiĝon, kaŭzante proplempunktojn en la asimiladprocezo. Koncerne al hidrolizo, ĝi estas farita de α- kaj β-glukozidazoj 31 . Tiuj enzimoj havas preferatajn substratojn depende de sia grandeco kaj la kemiaj ligoj (α aŭ β-ligoj) inter siaj konsistigaj monosakaridoj 15 . Hidrolizo de LAC al GLU kaj GAL estas farita per β-galaktosidase, enzimo kies agado estis pruvita en la intesto de BSF 32 . Tamen, ĝia esprimo povas esti nesufiĉa kompare kun la kvanto de LAC konsumita per larvoj. Kontraste, α-glucosidase maltazo kaj sukazo 15, kiuj povas esti abunde esprimitaj en insektoj, povas malkonstrui grandajn kvantojn de MAL kaj sakarozo SUC, tiel limigante tiun satigan efikon. Due, kontraŭnutraj efikoj povas ŝuldiĝi al la reduktita stimulo de insekta intesta amilaza aktiveco kaj la malrapidiĝo de nutra konduto kompare kun aliaj traktadoj. Efektive, solveblaj sukeroj estis identigitaj kiel stimuliloj de enzima aktiveco grava por insekta digesto, kiel amilazo, kaj kiel ellasiloj de la nutra respondo33,34,35. La grado de stimulado varias depende de la molekula strukturo de la sukero. Fakte, disakaridoj postulas hidrolizon antaŭ sorbado kaj tendencas stimuli amilazon pli ol siaj konsistigaj monosakaridoj34. En kontrasto, LAC havas pli mildan efikon kaj estis trovita esti malkapabla subteni insektkreskon en diversaj specioj33,35. Ekzemple, ĉe la plago Spodoptera exigua (Boddie 1850), neniu hidroliza agado de LAC estis detektita en eltiraĵoj de raŭpaj mezgutaj enzimoj36.
Koncerne la FA-spektron, niaj rezultoj indikas signifajn modulajn efikojn de la provita CH. Precipe, kvankam laŭra acido (C12: 0) konsistigis malpli ol 1% de la tuta FA en la dieto, ĝi regis en ĉiuj profiloj (vidu Suplementan Tabelon S1). Ĉi tio kongruas kun antaŭaj datumoj, ke laŭra acido estas sintezita de dieta CH en H. illucens per vojo implikanta acetil-CoA karboksilazon kaj FA-sintetazon19,27,37. Niaj rezultoj konfirmas, ke CEL estas plejparte nedigestebla kaj agas kiel "bulking agento" en BSF-kontrolaj dietoj, kiel diskutite en pluraj BSFL-studoj38,39,40. Anstataŭigi CEL kun monosakaridoj kaj disakaridoj krom LAC pliigis la C12:0-proporcion, indikante pliigitan CH-asimiladon de larvoj. Interese, la disakaridoj MAL kaj SUC antaŭenigas laŭrikan acidan sintezon pli efike ol siaj konsistigaj monosakaridoj, sugestante ke malgraŭ la pli alta grado da polimerigo de GLU kaj FRU, kaj ĉar Drosophila estas la nura sakarozotransportilo kiu estis identigita en bestproteinaj specioj, disakaridotransportiloj. eble ne ĉeestas en la intesto de larvoj de H. illucens15, la utiligo de GLU kaj FRU estas pliigita. Tamen, kvankam GLU kaj FRU estas teorie pli facile metaboligitaj fare de BSF, ili ankaŭ estas pli facile metaboligitaj per substratoj kaj intestmikroorganismoj, kiuj povas rezultigi sian pli rapidan degeneron kaj malpliigitan utiligon de larvoj komparite kun disakaridoj.
Unuavide, la lipidenhavo de larvoj nutritaj LAC kaj MAL estis komparebla, indikante similan biohaveblecon de ĉi tiuj sukeroj. Tamen, surprize, la FA-profilo de LAC estis pli riĉa je SFA, precipe kun pli malalta C12: 0 enhavo, kompare kun MAL. Unu hipotezo por klarigi tiun diferencon estas ke LAC povas stimuli la bioamasiĝon de dieta FA per acetil-CoA FA-sintezazo. Apogante ĉi tiun hipotezon, LAC-larvoj havis la plej malaltan dekanan (C10: 0) rilatumon (0.77 ± 0.13%) ol la CEL-dieto (1.27 ± 0.16%), indikante reduktitajn FA-sintezazon kaj tioesterazajn agadojn19. Due, manĝaj grasacidoj estas konsiderataj kiel la ĉefa faktoro influanta la SFA-konsiston de H. illucens27. En niaj eksperimentoj, linoleika acido (C18:2n6) konsistigis 54.81% de dietaj grasacidoj, kun la proporcio en LAC-larvoj estas 17.22 ± 0.46% kaj en MAL 12.58 ± 0.67%. Oleika acido (cis + trans C18: 1n9) (23,22% en la dieto) montris similan tendencon. La rilatumo de α-linolena acido (C18:3n3) ankaŭ apogas la bioakumulhipotezon. Oni scias, ke ĉi tiu grasacido akumuliĝas en BSFL sur substratriĉigo, kiel ekzemple aldono de linokuko, ĝis 6-9% de la totalaj grasacidoj en larvoj19. En riĉigitaj dietoj, C18:3n3 povas konsistigi ĝis 35% de la totalaj dietaj grasacidoj. Tamen, en nia studo, C18: 3n3 konsistigis nur 2.51% de la profilo de grasacido. Kvankam la proporcio trovita en la naturo estis pli malalta en niaj larvoj, ĉi tiu proporcio estis pli alta en LAC-larvoj (0.87 ± 0.02%) ol en MAL (0.49 ± 0.04%) (p <0.001; vidu Suplementan Tabelon S1). La CEL-dieto havis mezan proporcion de 0.72 ± 0.18%. Finfine, la palmita acida (C16:0) rilatumo en CF-larvoj reflektas la kontribuon de sintezaj vojoj kaj dieta FA19. Hoc et al. 19 observis, ke C16: 0-sintezo estis reduktita kiam la dieto estis riĉigita per lino-manĝo, kiu estis atribuita al malkresko de la havebleco de la acetil-CoA-substrato pro malkresko de la CH-proporcio. Surprize, kvankam ambaŭ dietoj havis similan CH-enhavon kaj MAL montris pli altan biohaveblecon, MAL-larvoj montris la plej malaltan C16:0-proporcion (10.46 ± 0.77%), dum LAC montris pli altan proporcion, respondecante pri 12.85 ± 0.27% (p < 0.05; vidu). Suplementa Tabelo S1). Ĉi tiuj rezultoj elstarigas la kompleksan influon de nutraĵoj sur BSFL-digestado kaj metabolo. Nuntempe, esplorado pri ĉi tiu temo estas pli ĝisfunda en Lepidoptera ol en Dipteroj. En raŭpoj, LAC estis identigita kiel malforta stimulilo de nutra konduto kompare kun aliaj solveblaj sukeroj kiel SUC kaj FRU34,35. Aparte, en Spodopteralittoralis (Boisduval 1833), MAL-konsumo stimulis amilolitan agadon en la intesto en pli granda mezuro ol LAC34. Similaj efikoj en BSFL povas klarigi la plifortigitan stimulon de la C12:0 sinteza pado en MAL-larvoj, kiu estas rilata al pliigita inteste sorbita CH, longedaŭra manĝado kaj intesta amilaza ago. Malpli stimulo de la manĝoritmo en la ĉeesto de LAC ankaŭ povas klarigi la pli malrapidan kreskon de LAC-larvoj. Plie, Liu Yanxia et al. 27 rimarkis, ke la konserva vivo de lipidoj en H. illucens-substratoj estis pli longa ol tiu de CH. Tial, LAC-larvoj povas fidi pli je dietaj lipidoj por kompletigi sian evoluon, kiu povas pliigi sian finan lipidenhavon kaj moduli sian grasacidan profilon.
Laŭ nia scio, nur kelkaj studoj testis la efikojn de monosakarido kaj disakarido aldono al BSF-dietoj sur siaj FA-profiloj. Unue, Li et al. 30 taksis la efikojn de GLU kaj ksilozo kaj observis lipidajn nivelojn similajn al la niaj kun 8% aldona indico. La profilo de FA ne estis detala kaj konsistis ĉefe el SFA, sed neniuj diferencoj estis trovitaj inter la du sukeroj aŭ kiam ili estis prezentitaj samtempe30. Krome, Cohn et al. 41 montris neniun efikon de 20% GLU, SUC, FRU kaj GAL-aldono al kokida nutrado sur la respektivaj FA-profiloj. Tiuj spektroj estis akiritaj de teknikaj prefere ol biologiaj kopioj, kiuj, kiel klarigite fare de la verkintoj, povas limigi la statistikan analizon. Krome, la manko de izo-sukera kontrolo (uzante CEL) limigas la interpreton de la rezultoj. Lastatempe, du studoj de Nugroho RA et al. pruvis anomaliojn en la FA-spektroj42,43. En la unua studo, Nugroho RA et al. 43 testis la efikon de aldoni FRU al fermentita palmkerno-manĝo. La FA-profilo de la rezultaj larvoj montris nenormale altajn nivelojn de PUFA, pli ol 90% de kiuj estis derivitaj de la dieto enhavanta 10% FRU (simila al nia studo). Kvankam ĉi tiu dieto enhavis PUFA-riĉajn fiŝajn buletojn, la raportitaj FA-profilaj valoroj de la larvoj sur la kontrola dieto konsistanta el 100% fermentita PCM ne estis kongruaj kun iu antaŭe raportita profilo, precipe la eksternorma nivelo de C18: 3n3 de 17.77. ± 1.67% kaj 26.08 ± 0.20% por konjugacita linoleika acido (C18:2n6t), malofta izomero de linoleika acido. La dua studo montris similajn rezultojn inkluzive de FRU, GLU, MAL kaj SUC42 en fermentita palmkerno-manĝo. Ĉi tiuj studoj, kiel la niaj, reliefigas gravajn malfacilaĵojn en komparo de rezultoj de BSF-larvaj dietaj provoj, kiel kontrolelektoj, interagoj kun aliaj nutraj fontoj kaj FA-analizaj metodoj.
Dum la eksperimentoj, ni observis ke la koloro kaj odoro de la substrato variis depende de la dieto uzata. Ĉi tio sugestas, ke mikroorganismoj povas ludi rolon en la rezultoj observitaj en la substrato kaj la digesta sistemo de la larvoj. Fakte, monosakaridoj kaj disakaridoj estas facile metaboligitaj per koloniantaj mikroorganismoj. La rapida konsumo de solveblaj sukeroj fare de mikroorganismoj povas rezultigi la liberigon de grandaj kvantoj de mikrobaj metabolaj produktoj kiel etanolo, laktacido, mallongĉenaj grasacidoj (ekz. acetacido, propionacido, butiracido) kaj karbondioksido44. Kelkaj el tiuj kunmetaĵoj povas kaŭzi la mortigajn toksajn efikojn al larvoj ankaŭ observitaj fare de Cohn et al.41 sub similaj evolukondiĉoj. Ekzemple, etanolo estas malutila al insektoj45. Grandaj kvantoj de karbondioksidaj emisioj povas rezultigi ĝian amasiĝon ĉe la fundo de la tanko, kiu povas senigi la atmosferon de oksigeno se aercirkulado ne permesas ĝian liberigon. Koncerne SCFA-oj, iliaj efikoj al insektoj, precipe H. illucens, restas nebone komprenitaj, kvankam lakta acido, propionacido kaj butiracido pruviĝis mortigaj en Callosobruchus maculatus (Fabricius 1775)46. En Drosophila melanogaster Meigen 1830, tiuj SCFAoj estas flaraj signoj kiuj gvidas inojn al ovometejoj, sugestante utilan rolon en larva evoluo47. Tamen, acetacido estas klasifikita kiel danĝera substanco kaj povas signife malhelpi larvan disvolviĝon47. En kontrasto, mikrobe derivita laktato ĵus estis trovita havi protektan efikon kontraŭ enpenetraj intestmikroboj en Drosophila48. Krome, mikroorganismoj en la digesta sistemo ankaŭ ludas rolon en CH-digestado en insektoj49. Fiziologiaj efikoj de SCFA-oj sur la intesta mikrobioto, kiel ekzemple nutra indico kaj gena esprimo, estis priskribitaj en vertebruloj 50 . Ili ankaŭ povas havi trofa efiko al H. illucens larvoj kaj povas kontribui delvis al la reguligo de FA-profiloj. Studoj pri la nutraj efikoj de ĉi tiuj mikrobaj fermentaj produktoj klarigos siajn efikojn al H. illucens-nutrado kaj provizos bazon por estontaj studoj pri utilaj aŭ malutilaj mikroorganismoj laŭ sia evoluo kaj la valoro de FA-riĉaj substratoj. Ĉi-rilate, la rolo de mikroorganismoj en la digestaj procezoj de amase farmitaj insektoj estas ĉiam pli studata. Insektoj komencas esti rigardataj kiel bioreaktoroj, provizantaj pH kaj oksigenadaj kondiĉoj, kiuj faciligas la disvolviĝon de mikroorganismoj specialigitaj pri degenero aŭ senvenenigo de nutraĵoj, kiuj malfacilas por insektoj digesti 51 . Lastatempe, Xiang et al.52 pruvis ke, ekzemple, inokulado de organika rubo kun bakteria miksaĵo permesas al CF altiri bakteriojn specialigitajn pri lignoceluloza degradado, plibonigante ĝian degeneron en la substrato kompare kun substratoj sen larvoj.
Finfine, koncerne la utilan uzon de organika rubo fare de H. illucens, la CEL kaj SUC-dietoj produktis la plej altan nombron da larvoj tage. Tio signifas ke malgraŭ la pli malalta fina pezo de individuaj individuoj, la totala larva pezo produktita sur substrato konsistanta el nedigestebla CH estas komparebla al tio akirita sur homosakariddieto enhavanta monosakaridojn kaj disakaridojn. En nia studo, estas grave noti, ke la niveloj de aliaj nutraĵoj sufiĉas por subteni la kreskon de la larva populacio kaj ke la aldono de CEL devus esti limigita. Tamen, la fina konsisto de la larvoj malsamas, elstarigante la gravecon elekti la ĝustan strategion por valorigado de la insektoj. CEL-larvoj manĝitaj kun tuta nutrado estas pli taŭgaj por uzo kiel besta nutrado pro sia pli malalta grasenhavo kaj pli malaltaj laŭrikacido-niveloj, dum larvoj manĝitaj kun SUC aŭ MAL-dietoj postulas sengrasadon per premado por pliigi la valoron de la oleo, precipe en la biofuelo. sektoro. LAC troviĝas en laktoindustriaj kromproduktoj kiel ekzemple selakto de fromaĝproduktado. Lastatempe, ĝia uzo (3,5% laktozo) plibonigis finan larvan korpan pezon53. Tamen, la kontrola dieto en ĉi tiu studo enhavis duonon de la lipida enhavo. Tial, la kontraŭnutraj efikoj de LAC eble estis rebatitaj per larva bioamasiĝo de manĝlipidoj.
Kiel montrite de antaŭaj studoj, la propraĵoj de monosakaridoj kaj disakaridoj signife influas la kreskon de BSFL kaj modulas ĝian FA-profilon. Aparte, LAC ŝajnas ludi kontraŭnutran rolon dum larva evoluo limigante la haveblecon de CH por manĝlipidsorbado, tiel antaŭenigante UFA-bioamasiĝon. En ĉi tiu kunteksto, estus interese fari bioanalizojn uzante dietojn kombinantajn PUFA kaj LAC. Krome, la rolo de mikroorganismoj, precipe la rolo de mikrobaj metabolitoj (kiel ekzemple SCFAoj) derivitaj de sukerfermentprocezoj, restas esplortemo inda je enketo.
Insektoj estis akiritaj de la BSF-kolonio de la Laboratorio de Funkcia kaj Evolua Entomologio establita en 2017 ĉe Agro-Bio Tech, Gembloux, Belgio (por pliaj detaloj pri bredado-metodoj, vidu Hoc et al. 19). Por eksperimentaj provoj, 2,0 g da BSF-ovoj estis hazarde kolektitaj ĉiutage el reproduktaj kaĝoj kaj kovataj en 2,0 kg da 70% malseka kokida nutraĵo (Aveve, Leuven, Belgio). Kvin tagojn post eloviĝo, larvoj estis apartigitaj de la substrato kaj kalkulitaj permane por eksperimentaj celoj. La komenca pezo de ĉiu aro estis mezurita. La averaĝa individua pezo estis 7.125 ± 0.41 mg, kaj la mezumo por ĉiu traktado estas montrita en Suplementa Tabelo S2.
La dietoformulo estis adaptita de la studo de Barragan-Fonseca et al. 38 . Mallonge, kompromiso estis trovita inter la sama furaĝkvalito por larvaj kokidoj, simila seka materio (DM) enhavo, alta CH (10% surbaze de freŝa dieto) kaj teksturo, ĉar simplaj sukeroj kaj disakaridoj havas neniujn teksturajn trajtojn. Laŭ la informoj de la fabrikanto (Chicken Feed, AVEVE, Leuven, Belgio), la provita CH (t.e. solvebla sukero) estis aldonita aparte kiel aŭtoklava akva solvaĵo (15,9%) al dieto konsistanta el 16,0% proteino, 5,0% totalaj lipidoj, 11.9% muelita kokidmanĝo konsistanta el cindro kaj 4.8% fibro. En ĉiu vazo de 750 ml (17,20 × 11,50 × 6,00 cm, AVA, Tempsee, Belgio), 101,9 g da aŭtoklava CH-solvo estis miksitaj kun 37,8 g da kokida nutraĵo. Por ĉiu dieto, la enhavo de seka materio estis 37,0%, inkluzive de homogena proteino (11,7%), homogenaj lipidoj (3,7%) kaj homogenaj sukeroj (26,9% de aldonita CH). La CH provitaj estis glukozo (GLU), fruktozo (FRU), galaktozo (GAL), maltozo (MAL), sakarozo (SUC) kaj laktozo (LAC). La kontrola dieto konsistis el celulozo (CEL), kiu estas konsiderata nedigestebla por larvoj de H. illucens 38 . Cent 5-tagaj larvoj estis metitaj en pleton kun kovrilo kun 1 cm diametra truo en la mezo kaj kovritaj per plasta moskito. Ĉiu dieto estis ripetita kvar fojojn.
Larvaj pezoj estis mezuritaj tri tagojn post la komenco de la eksperimento. Por ĉiu mezurado, 20 larvoj estis forigitaj de la substrato uzante sterilan varman akvon kaj forcepon, sekigitaj kaj pesitaj (STX223, Ohaus Scout, Parsippany, Usono). Post pesado, larvoj estis resenditaj al la centro de la substrato. Mezuradoj estis faritaj regule tri fojojn semajne ĝis la unua prepupo aperis. Je ĉi tiu punkto, kolektu, kalkulu kaj pezu ĉiujn larvojn kiel priskribite antaŭe. Apartigu ŝtupon 6 larvojn (t.e., blankajn larvojn respondantajn al la larva stadio antaŭanta la antaŭpupan stadion) kaj prepupojn (t.e., la lasta larva stadio dum kiu BSF-larvoj nigriĝas, ĉesas manĝi kaj serĉas medion taŭgan por metamorfozo) kaj konservu ĉe - 18 °C por kompona analizo. La rendimento estis kalkulita kiel la rilatumo de la totala maso de insektoj (larvoj kaj prepupoj de la etapo 6) akirita per plado (g) al la evoluotempo (d). Ĉiuj averaĝaj valoroj en la teksto estas esprimitaj kiel: meznombro ± SD.
Ĉiuj postaj paŝoj uzantaj solvilojn (heksano (Hex), kloroformo (CHCl3), metanolo (MeOH)) estis faritaj sub fumkapuĉo kaj postulis porti nitrilegajn gantojn, antaŭtukojn kaj sekurecajn okulvitrojn.
Blankaj larvoj estis sekigitaj en frostsekigilo FreeZone6 (Labconco Corp., Kansasurbo, MO, Usono) dum 72 h kaj poste muelitaj (IKA A10, Staufen, Germanio). Totalaj lipidoj estis ĉerpitaj el ± 1 g da pulvoro uzante la Folch-metodon 54. La postrestanta humideca enhavo de ĉiu liofiligita specimeno estis determinita duplikate per humida analizilo (MA 150, Sartorius, Göttiggen, Germanio) por korekti por totalaj lipidoj.
Totalaj lipidoj estis transesterigitaj sub acidaj kondiĉoj por akiri grasacidajn metiesterojn. Mallonge, proksimume 10 mg lipidoj/100 µl CHCl3-solvo (100 µl) vaporiĝis kun nitrogeno en tubo de 8 ml Pyrex© (SciLabware - DWK Life Sciences, Londono, Britio). La tubo estis metita en Hex (0,5 ml) (PESTINORM®SUPRATRACE n-Hexane > 95% por organika spuranalizo, VWR Chemicals, Radnor, PA, Usono) kaj Hex/MeOH/BF3 (20/25/55) solvo (0,5). ml) en akvobano je 70 °C dum 90 min. Post malvarmigo, 10% akva H2SO4-solvo (0,2 ml) kaj saturita NaCl-solvo (0,5 ml) estis aldonitaj. Miksu la tubon kaj plenigu la miksaĵon per pura Hex (8.0 mL). Parto de la supra fazo estis transdonita al fiolo kaj analizita per gaskromatografio per flama joniga detektilo (GC-FID). Specimenoj estis analizitaj uzante Trace GC Ultra (Thermo Scientific, Waltham, MA, Usono) ekipita per disfendita/sendividita injekciilo (240 °C) en dividita reĝimo (dividita fluo: 10 mL/min), kolumno Stabilwax®-DA ( 30 m, 0.25 mm id, 0.25 μm, Restek Corp., Bellefonte, PA, Usono) kaj FID (250 °C). La temperaturprogramo estis fiksita jene: 50 °C dum 1 min, pliiĝante ĝis 150 °C je 30 °C/min, pliiĝante ĝis 240 °C je 4 °C/min kaj daŭrigante je 240 °C dum 5 min. Hex estis utiligita kiel malplena kaj referencnormo enhavanta 37 grasacidajn metilesterojn (Supelco 37-komponent FAMEmix, Sigma-Aldrich, Overijse, Belgio) estis utiligita por identigo. La identigo de nesaturitaj grasacidoj (UFAoj) estis konfirmita per ampleksa dudimensia GC (GC×GC-FID) kaj la ĉeesto de izomeroj estis precize determinita per eta adapto de la metodo de Ferrara et al. 55. Instrumentaj detaloj troveblas en Suplementa Tabelo S3 kaj la rezultoj en Suplementa Figuro S5.
La datumoj estas prezentitaj en Excel-kalkultabelformato (Microsoft Corporation, Redmond, WA, Usono). Statistika analizo estis farita per R Studio (versio 2023.12.1+402, Boston, Usono) 56 . Datenoj pri larva pezo, evoluotempo kaj produktiveco estis taksitaj uzante la linearan modelon (LM) (komando "lm", R-pakaĵo "stats" 56 ) ĉar ili konvenas gaŭsan distribuon. Supervivaj indicoj uzante binoman modelan analizon estis taksitaj uzante la ĝeneralan linearan modelon (GLM) (komando "glm", R-pakaĵo "lme4" 57). Normaleco kaj homoscedasteco estis konfirmitaj per la Shapiro-testo (komando "shapiro.test", R-pakaĵo "stats" 56 ) kaj analizo de datuma varianco (komando betadisper, R-pakaĵo "vegan" 58 ). Post para analizo de signifaj p-valoroj (p < 0.05) de la LM aŭ GLM-testo, signifaj diferencoj inter grupoj estis detektitaj per la EMM-testo (komando "emmeans", R-pakaĵo "emmeans" 59).
La kompletaj FA-spektroj estis komparitaj uzante multvarian permutan analizon de varianco (t.e. permMANOVA; komando "adonis2", R-pakaĵo "vegano" 58) uzante la eŭklidan distancmatricon kaj 999 permutaĵojn. Ĉi tio helpas identigi grasajn acidojn, kiuj estas influitaj de la naturo de dietaj karbonhidratoj. Signifaj diferencoj en la FA-profiloj estis plue analizitaj uzante duopaj komparoj. La datumoj tiam estis bildigitaj uzante ĉefkomponentan analizon (PCA) (komando "PCA", R-pakaĵo "FactoMineR" 60). La FA respondeca por ĉi tiuj diferencoj estis identigita interpretante la korelaciajn cirklojn. Ĉi tiuj kandidatoj estis konfirmitaj per unudirekta analizo de varianco (ANOVA) (komando "aov", R-pakaĵo "stats" 56 ) sekvita de la post hoc-testo de Tukey (komando TukeyHSD, R-pakaĵo "stats" 56 ). Antaŭ analizo, normaleco estis taksita per la Shapiro-Wilk-testo, homoscedasteco estis kontrolita per la Bartlett-testo (komando "bartlett.test", R-pakaĵo "stats" 56), kaj neparametrika metodo estis uzata se neniu el la du supozoj estis plenumita. . Oni komparis analizojn (komando “kruskal.test”, R-pakaĵo “stats” 56 ), kaj poste la post hoc testoj de Dunn estis aplikitaj (komando dunn.test, R-pakaĵo “dunn.test” 56 ).
La fina versio de la manuskripto estis kontrolita uzante Grammarly Editor kiel anglan provleganton (Grammarly Inc., San Francisco, Kalifornio, Usono) 61 .
La datumaroj generitaj kaj analizitaj dum la nuna studo estas haveblaj de la responda aŭtoro laŭ akceptebla peto.
Kim, SW, et al. Renkontante la tutmondan postulon je furaĝproteino: defioj, ŝancoj kaj strategioj. Analoj de Bestaj Biosciencoj 7, 221-243 (2019).
Caparros Megido, R., et al. Revizio de la statuso kaj perspektivoj de monda produktado de manĝeblaj insektoj. Entomol. Ĝen. 44, (2024).
Rehman, K. ur, et al. Nigra soldata muŝo (Hermetia illucens) kiel eble noviga kaj ekologia ilo por organika rubo-administrado: Mallonga revizio. Waste Management Research 41, 81-97 (2023).
Skala, A., et al. La bredado de substrato influas kreskon kaj makronutran statuson de industrie produktitaj nigraj soldatmuŝolarvoj. Sci. Rep. 10, 19448 (2020).
Shu, MK, et al. Antimikrobaj ecoj de oleaj ekstraktoj de nigraj soldatmuŝolarvoj breditaj sur panpecetoj. Besta Nutraĵa Scienco, 64, (2024).
Schmitt, E. kaj de Vries, W. (2020). Eblaj avantaĝoj de uzado de nigra soldatmuŝsterko kiel grunda amendo por nutraĵproduktado kaj reduktita media efiko. Aktuala opinio. Verda Subteno. 25, 100335 (2020).
Franco A. et al. Nigraj soldatmuŝoj lipidoj - noviga kaj daŭrigebla fonto. Daŭripova Evoluo, Vol. 13, (2021).
Van Huis, A. Insektoj kiel manĝaĵo kaj furaĝo, emerĝanta kampo en agrikulturo: revizio. J. Insekta Nutraĵo 6, 27–44 (2020).
Kachor, M., Bulak, P., Prots-Petrikha, K., Kirichenko-Babko, M., kaj Beganovsky, A. Diversaj uzoj de nigra soldatmuŝo en industrio kaj agrikulturo - recenzo. Biologio 12, (2023).
Hock, B. , Noel, G. , Carpentier, J. , Francisko, F., kaj Caparros Megido, R. Optimumigo de artefarita disvastigo de Hermetia illucens. PLOS UNU 14, (2019).
Afiŝtempo: Dec-25-2024